לאחר שהתאים מופיעים מנותקים, הוסף 2 כרכים של חומר גידול מלא שחומם מראש כדי להשבית את הטריפסין. פזר בעדינות את המדיום על ידי פיפטציה על פני שכבת התא מספר פעמים כדי להבטיח התאוששות של >95% מהתאים.
איך אני מפסיק את פעילות הטריפסין?
ניתן לעצור את עיכול הטריפסין על ידי freezing או על ידי הורדת ה-pH של התגובה מתחת ל-pH 4 על ידי הוספת חומצה פורמית, אצטית או טריפלואורואצטית (הטריפסין יחזור לפעילות כאשר ה-pH מועלה מעל pH 4). ניתן לאחסן דגימות מעוכלות ב-20 מעלות צלזיוס.
מה מנטרל טריפסין?
חיץ המכיל יוני סידן ומגנזיום גם יאט את פעילות הטריפסין. עם זאת, FBS היא הדרך היעילה יותר לעכב פעילות טריפסין.
האם הסרום משבית טריפסין?
הסרום משבית את שארית הטריפסין שנותרה מעיכול אנזימטי של הכליות והאנזימים הפרוטאוליטיים שסונתזו לאחר מכן על ידי התאים. ניתן לגדל תאים טריפסין טריים לשכבות מונו-שכבות בהיעדר סרום בתנאי שהם נשטפו שוב ושוב כדי להסיר שאריות טריפסין.
כמה מדיה נדרשת כדי לבטל טריפסין?
כל עוד אתה משתמש ב-לפחות יחס 1:1 של 5-10% סרום-מדיום המכיל את הטריפסין שלך, אמור להיות עיכוב די והותר, ואחריו צנטריפוגה והחלפה בינונית עם מדיום טרי.
