טריפסיניזציה הוא תהליך של פירוק תאים באמצעות טריפסין, אנזים פרוטאוליטי המפרק חלבונים, כדי לנתק תאים נצמדים מהכלי שבו הם מתרבים. כאשר מוסיפים לתרבית תאים, טריפסין מפרק את החלבונים המאפשרים לתאים להיצמד לכלי.
למה אנחנו עושים טריפסיניזציה לתאים?
טריפסיניזציה מתבצעת לעתים קרובות כדי לאפשר מעבר של התאים למיכל חדש, תצפית לצורך ניסוי, או הפחתה של מידת ההתכנסות בבקבוק על ידי הסרה של אחוז של התאים.
איך טריפסין פועל לניתוק תאים?
Trypsin/EDTA היא שיטה משולבת לניתוק תאים. טריפסין חותך את חלבוני ההדבקה באינטראקציות תא-תא ומטריצה של תא על ידי חיתוך חומצת האמינו של חלבוני ההדבקה באופן ספציפי בליזין או אג'ינין במסוף C אם חומצת אמינו במעלה הזרם אינה פרולין.
איך משיגים תאים דבקים בטריפסין?
הליך
- הסר את המדיום מכלי התרבית בשאיבה ושטוף את השכבה החד-שכבתית בתמיסת מלח ללא Ca2+ ו-Mg 2+ כדי להסיר את כל עקבות הסרום. …
- חלק מספיק תמיסת טריפסין או טריפסין/EDTA לתוך כלי תרבית כדי לכסות לחלוטין את השכבה החד-שכבתית של התאים והנח בחממה של 37 מעלות צלזיוס למשך ~2 דקות.
איך אני משבית טריפסין בתרבית תאים?
לאחר שהתאים מופיעים מנותקים הוסף 2 כרכיםשל חומר גידול מלא שחומם מראש כדי להשבית את הטריפסין. לפזר בעדינות את המדיום על ידי פיצול על פני שכבת התא מספר פעמים כדי להבטיח התאוששות של >95% מהתאים. עבור תרביות ללא סרום, מעכב טריפסין פולי סויה (מספר מוצר
