קודם כל, הן EcoR1 והן Xba1 משאירות נקודות על של 5' כשהן מעכלות DNA (כמו גם Nde1). בשני המקרים קצה 3' שקוע וזו הסיבה שפוליארמאס יכול להוסיף בסיסים. שנית כל הפולימראזות יכולות להוסיף בסיסים רק לקצה של 3', אז ה-Klenow יוסיף 4 בסיסים לקצה ה-3' הנסוג של שני האתרים כדי ליצור קצוות קהים.
האם אנזימי הגבלה משאירים 5 פוספט?
וקטורים ותוספות שמתעכלים על ידי אנזימי הגבלה מכילים את השינויים הסופיים הדרושים (פוספט 5' והידרוקסיל 3'), בעוד ששברים שנוצרו על ידי תגובת שרשרת הפולימראז (PCR) עשויים שלא.
האם ניתן לקשור קצוות קהים?
קשירת קצה קהה
קשירת קצה קהה אינה כוללת זיווג בסיסי של הקצוות הבולטים, לכן כל קצה קהה עשוי להיקשר לקצה קהה אחר. קצוות קהים עשויים להיווצר על ידי אנזימי הגבלה כגון SmaI ו-EcoRV.
האם Taq polymerase מייצר קצוות קהים?
Yes… Taq Polymerase מוסיף A-Overhangs אם תשמור את שלב ההרחבה הסופי ב-72 dC ב-PCR. משמש בעיקר עבור שיבוט TA.
למה להשתמש בקטע של Klenow בריצוף DNA?
הקטע של Klenow שימושי ביותר עבור משימות מבוססות מחקר כגון: סינתזה של DNA דו-גדילי מתבניות חד-גדיליות . מילוי קצוות נסוגים של 3' של שברי DNA כדי להפוך 5' לתלייה קהה . עכל את הרחבות הבולטות של 3'.
